精液的冷冻保存是一项重大的技术革新，精液通过冷冻保存，可供长期使用，进一步发挥了优秀种公兔的作用。　　精液冷冻保存的程序，大致分采精、精液品质检查、稀释、平衡、冷冻、解冻镜检、保存(-196℃液氮)。　　①采精。用常规的假阴道方法采精。　　②精液的品质检查。检查方法及项目同人工授精中精液的品质检查。由于冷冻过程中一些生命力弱的精子经受不住强烈的冷刺激而死亡，故冷冻精液对精液的质量要求更严格。凡活力不足0.5以上，密度低于1亿/毫升，畸形率大于15%的精液，均不适于冷冻保存。　　③稀释。一般分两步进行。第一步，在精液温度28～30℃时，用不含甘油的稀释液进行1：0.5～1稀释;第二步，待精液徐徐降温至0.5℃时，用含甘油或加入二甲亚砜的稀释液，再进行1:0.5～1稀释。　　国内报道试用的稀释液配方及稀释程序有以下4种：　　第一种(江苏胡家飘等1983年报道)：取三羟甲基氨基甲烷(Tris)3.028克，D-葡萄糖1.25克，柠檬酸1.675克，二甲亚砜(DMSO)5毫升，重蒸馏水加至100毫升，另加卵黄20毫升，青霉素、链霉素各10万单位，配制成稀释液的第一液，供第一步稀释用。之后，在第一液中加入1%的甘油(即甘油最终浓度为1%)，供冷冻前半小时第二步稀释用。　　第二种(山东邱萃藩等1982年试验筛选)：取蒸馏水100毫升，蔗糖5克，乳糖5克，卵黄2毫升，青霉素10万单位，配制成稀释液的第一液，供第一步稀释用。之后，取第一液76毫升，甘油6毫升，卵黄18毫升配制成稀释液的第二液，供第二步稀释用。　　第三种(来源同第二种)：取蒸馏水100毫升，蔗糖9克，果糖2克，卵黄2毫升，青霉素10万单位，配制成稀释液的第一液，供第一步稀释用。之后，取第一液76毫升，甘油6毫升，卵黄18毫升，配制成稀释液的第二液，供第二步稀释用。　　第四种(江苏启东县胡德新1989年报道)：取三羟甲基氨基甲烷2.52克，葡萄糖1.05克，柠檬酸1.41克，蒸馏水84毫升，卵黄16毫升，配制成基础液。取基础液91毫升，二甲亚砜9毫升，配制成第一液，供第一步稀释用。再取基础液95毫升，甘油5毫升，配制成第二液，供第二步稀释用。　　④平衡。将稀释后的精液分装，包以1厘米厚的纱布，于0～5℃低温处静置数小时。　　目前，国内报道效果较好的平衡温度及平衡方式大体有以下3种：第一种：将经两步稀释的、含甘油的精液，在O～5℃处放置2～5小时;第二种：将仅经第一步稀释的即不含甘油的精液，于3～5℃冰箱中放置2～3小时;第三种：取第一液稀释后，用药棉包裹的精液于3～5℃冰箱内，静置0.5小时后，按原精液1:1添加等温的第二液，再于3～5℃冰箱内静置1～1.5小时。　　⑤冷冻。以液氮为冷源，在铝板或铜网上，使初冻温度达到一定时，进行颗粒、安瓿或细管冷冻。目前，国内冷冻方式主要有以下3种方式：　　第一种：取广口保温瓶，灌入液氮至七成满为度，将孑L径0.216毫米(80目)铜网制成的小圆网，悬吊于液氮上方，于小圆网上固定一超低温温度计，调整小圆网与液氮表面的距离，使网的温度在-70～90℃。将平衡后的精液迅速、均匀滴在小圆网上，使每颗粒容量为0.15毫升。待精液颗粒在小圆网上停留3—5分钟，颗粒颜色由黄变白时，将其浸入液态氮中。　　第二种：使铝板距液氮面1～2厘米，铝板上1厘米处放置纱网，将含有0.25～0.3毫升稀释精液的安瓿直立于纱网上停留6～8分钟，待安瓿冻裂声过后，即浸入液氮中。或将平衡精液滴在纱网上，每颗粒剂量为0.3毫升，停留3～5分钟后，浸入液氮中。　　第三种：置铜网于液氮上方，将含有0.25毫升的安瓿直立于铜网上，安瓿不封口，熏蒸5～6分钟后，缓缓浸入液氮中或者将平衡精液滴在铜网上，每颗粒剂量0.1毫升，熏蒸5～6分钟后，缓慢浸入液氮中。　　⑥解冻镜检。精液冷冻后，需抽样检测其质量，随机取样，在一定温度下解冻，在显微镜下检测，如果解冻后的精子活率在0.3以上，说明冻精合格，随即将所冷冻的精液收集，附以写有公兔品种、耳号、制作日期、批号等的标签，浸入液氮中长期保存。否则，冻精解冻后的活力低于0.3，则为不合格，冻精废除，应查明原因。目前国内采用的解冻方式有3种：第一种：使颗粒或安瓿冷冻精液于40℃温水浴中快速解冻;第二种：于55℃水浴中快速解冻;第三种：将冷冻颗粒精液放入小试管，置50℃水浴中作干解冻。　　⑦保存。解冻镜检合格的精液，可置于液氮罐中作长期保存-196℃，随用随取。平时注意液氮罐中保持有一定的液氮即可。