猪繁殖与呼吸综合征——诊断检测

    本病主要根据流行病学、临诊症状、病毒分离鉴定及血清抗体检测进行综合诊断。在生产的任何阶段只要出现呼吸道症状,发现有繁殖障碍,并且猪群性能表现不理想时,就应当考虑PRRS。但因为PRRSV常呈轻度或亚临床感染,所以当缺少临诊症状时,并不表明猪群无PRRSV感染。确诊则必须按《猪繁殖与呼吸综合征诊断方法》(GB/T18089-2000)(附件1)进行实验室检测。

    1.病原分离和鉴定

    分离病毒最好应用猪肺泡巨噬细胞或CL-2621细胞,但以前者的敏感性较高。常取急性期病猪的血清、胸水、腹水或病死猪的肺、扁桃体、脾脏、淋巴结等病料分离病毒。新分离的病毒往往不能引起细胞病变,需要将其进行2~3次继代培养才能产生病变。病料接种的细胞培养物可通过标记抗体染色的方法检测。

    2.血清学试验

    PRRSV抗体可以应用免疫过氧化物法(IPMA)、间接荧光抗体法(IFA)、ELISA法及病毒中和试验(SNT)等方法检测。IMPA法反应灵敏,可以用于区别欧洲毒株和美洲毒株,其抗体通常在感染后7~14d出现。ELISA方法灵敏度高、特异性强,目前有标准化的试剂盒供应市场,无论欧洲毒株或美洲毒株感染均可检测,并可同时检测多量样品。IFA法简便易行、诊断快速,其抗体一般在感染后5~7d出现,效价达1:20以上可判定为阳性,可以用于群体检疫。血清中和试验抗体需数周乃至数月才能出现,故其敏感性低,不太适合于PRRSV感染的诊断。

    血清学实验结果必须考虑到PRRS疫苗接种状态、猪的年龄和PRRS区域性流行状况,因为血清学试验不能区分自然感染和疫苗毒株,并且感染后5~10周龄仔猪可能有母源抗体。当检测新近感染状况时,应当向诊断实验室提供急性和恢复期血清样品,从而可能分析感染前后抗体水平的变化情况。

    3.病原检测

    免疫过氧化物酶(IP)技术、免疫荧光抗体染色技术(IFA)、免疫金银染色法(IGSS)、原位杂交技术、聚合酶链式反应(PCR)等均可用于PRRSV抗原检测。其中,核酸探针杂交和PCR检测技术,具有高度特异性和高灵敏度,检测速度快,结果可靠,引物和探针可大量合成并长期保存,会具有越来越广泛的应用前景。

    PCR是检测RNA病毒的一种敏感的技术,PCR是检测精液中PRRSV高度敏感的方法。Jane等设计了ORF1b的两端正义和反义引物及半嵌入式正义和反义引物,以及根据ORF7设计了两端正义和反义引物及嵌入式正义和反义引物,建立了检测PRRSV的反向转录,端部PCR和嵌入式PCR方法。后来的许多研究揭示了ORF7是RT-PCR检测PRRSV的潜在目标,国内李勇等根据ORF7设计了一对引物,建立了检测PRRSV的反RT-PCR,检测仔猪肺、脾脏和血清中PRRSV,结果均扩增出了与预期大小(468bp)相当的条带。目前检测高致病性蓝耳病检测主要采用PCR方法。

    4.鉴别诊断

    当猪群出现繁殖障碍时,应注意与猪细小病毒感染、伪狂犬病、乙脑等疫病鉴别。哺乳仔猪出现呼吸道症状时应与伪狂犬病、猪流感等鉴别。当猪群出现高热症状时,应注意与猪瘟、附红细胞体、弓形体病等鉴别诊断。PRRS鉴别诊断见附件2。

    5.高致病性猪蓝耳病诊断

    根据流行病学、临床症状和病理变化可对高致病性猪蓝耳病作出初步诊断。但确诊需要实验室进行病毒分离鉴定或用高致病性猪蓝耳病病毒RT-PCR检测。

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