白凤翎
（锦州师范学院食品科学系，辽宁 锦州 121000）
摘要：双缩脲法测定饲料中蛋白质的含量相对于传统的凯氏定氮法具有快速、简单、准确等优点。该法主要是利用蛋白质与双缩脲试剂发生反应，产生一种含铜的环状复合物，该复合物呈紫红色，且在540nm处有吸收峰，其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比。
关键词：饲料；蛋白质；双缩脲
中图分类号：S 8l6.17 文献标识码：A 文章编号：1003－6202（2003）03－0046－02
蛋白质是饲料的重要组成部分，蛋白质含量直接关系到饲料的质量。饲料中蛋白质的检测十分重要，目前国家标准采用凯氏定氮法，此法的缺点：①样品需要消化处理，时间长，测定过程烦琐；②测定的是含氮化合物（其中包括一些非蛋白氮），结果称为粗蛋白。本文介绍双缩脲法测定饲料的蛋白质。相对于凯氏定氮法，该法的优点是样品不需消化处理，结果为饲料中蛋白质的真实含量，操作简单，具有快速、准确等优点。
1 原理与试剂
1.1 原理
饲料中蛋白质由多种氨基酸组成，各种氨基酸的氨基与羧基相互作用，形成可与双缩脲反应的一CO－－NH基团。在碱性条件下，它能与硫酸铜作用，铜离子与肽键相配位形成一种含铜的环状复合物，呈紫红色。此化合物在540mm处有吸收峰，其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸组成无关。因此，将饲料检样用碱性溶液处理后，与双缩脲试剂反应，所得吸光值在标准曲线上查出所对应的值，得到样品蛋白质的含量。
1.2 试剂
双缩脲试剂：称取CuSO45H2O 1.5g酒石酸钾钠（NaKC4O6·4H2O）6g，溶于500ml蒸馏水，在搅拌下加入300ml质量分数10％NaOH溶液，然后用蒸馏水稀释到100ml。配好后贮于塑料瓶中。若长期存放该试剂，在配制时需加入1g碘化钾，防止铜离子自动还原成一价氧化铜沉淀。
蛋白质标准溶液（4g／dl）：北京中生生物工程高技术公司。
2 测定方法
2.1 标准曲线绘制
将蛋白质标准液（4g／dl）用0.1mol／L NaOH溶液稀释至4mg/ml。分别取蛋白质标准液（4mg／ml）0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml于2ml具塞比色试管中，不足1ml者用蒸馏水补齐至1.0ml，然后各比色管中加入4.01ml双缩脲试剂，混匀，室温下反应30min。以空白管调零，用722型分光光度计在540mm波长，杯径1cm，测定吸光值。以蛋白质含量为横坐标，以吸光值为纵坐标作标准曲线。
2.2 饲料中蛋白质的测定
样品来源：锦州金太阳饲料有限责任公司
样品处理：将送检样品粉碎后经40目筛过滤，准确称取0.2g（准确至0.0002g）饲料样品于具塞试管中，加人质量分数10％KOH溶液10ml，隔水煮沸约30min，冷却后用蒸馏水定容至25ml。取饲料提取过滤液0.5ml，以蒸留水补齐至1.0ml,加4ml双缩脲试剂，室温下反应30min。以空白管调零，在540nm处测定吸光值，之后查对标准曲线，可求得饲料蛋白质的含量。
3 结果与讨论
3.1 标准曲线
经测定，绘制标准曲线如图1所示。（图略）
由图1可以看出，曲线上的6个点中，前5个点在一条直线上，第6个点略低于标准曲线，这说明用双缩脲肥法测定蛋白质时反应液中的蛋白质含量不应高于2.0mg／ml，否则，会导致测定结果偏低。
3.2 饲料中蛋白质的测定结果及精密度
对同一饲料，分别取10个样品测定蛋白质含量，其结果见表1。
表1 同一饲料蛋白质含量测定结果mg／g
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饲料检样 |
含量 |
饲料检样 |
含量 | ||||||
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1 |
162.84 |
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