C.1适用范围
本方法用于测定动物可食性组织中土霉素的残留素。
C.2原理
组织经MCI－Vaine-Na2EDTA缓冲液（pH4.0)提取，过滤后，通过C18微柱水洗后，用草酸甲醇将药物洗?脱，洗脱液用高效液相色谱仪进行检测。
C.3可靠的检测限
本方法在动物可食性组织中的检测限为0.05μg/g。
C.4仪器。
C.4.1高效液相色谱仪，配紫外检测器。
C.4.2匀浆机。
C.4.3离心机。
C.4.4漩涡混合器。
C.4.5自动电位滴定计。
C.4.6磁力加热搅拌器。
C.4.7C18微柱。
C.4.8布氏漏斗。
C.4.9球形漏斗。
C.4.10滤膜：0.45μm。
C.4.11抽滤瓶。
C.5药品和试剂
C.5.1盐酸土霉素标准品：纯度≥90％。
C.5.2乙腈：色谱纯。
C.5.3甲醇：分析纯。
C.5.4乙酸铵：分析纯。
C.5.5柠檬酸：分析纯。
C.5.6依地酸二钠：分析纯。
C.5.7磷酸氢二钠：分析纯。
C.5.8草酸：分析纯。
C.5.9三氟乙酸：分析纯。
C.5.10N，N－二甲基甲酰胺：分析纯。
C.5.11草酸铵：分析纯。
C.5.12磷酸氢二铵：分析纯。
C.6溶液
C.6.1土霉素标准液：准确称取适量盐酸土霉素标准品，用甲醇配成浓度为100μg/mL的标准储备液，置冰箱中保存。临用前，取此储备液，用甲醇依次稀释成浓度为5.0、0.2、1.0、0.5、0、25、0.1、0.05μg/mL的标准工作液。
C.6.2MCI－Vaine缓冲液：准确称取Na2HPO428.41g,用水溶解，定容于1000mL,容量瓶中，简称溶液A。准确称取柠檬酸21.00g，用水溶解，定容于1000mL容量瓶中，简称溶液B。取625mL溶液A和1000mL溶液B混匀，调节pH至4.0±0.05。
C.6.3MCI－Vaine-Na2EDTA液：准确称取Na2EDTA60.49g溶解于1625mL的MCI－Vaine液中，使成含0.01mol/L?Va2EDTA的MCI－Vaine液。
C.6.40.01mol/L草酸甲醇：准确称取草酸1.26g，甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。
C.6.50.01mol/L草酸溶液:准确称取草酸1.26g，水溶解并定容于1000mL容量瓶中。
C.7分析
C.7.1提取和纯化
C.7.1.1称取5.00g组织匀浆（精确到0.1g）放入50mL聚丙烯离心管中，添加TCS药物，使成相应的浓度。
C.7.1.2加20mL?MCI－Vaine-Na2EDTA液,盖上帽，漩涡半分钟，手摇5min。
C.7.1.3以4500r/min的速度离心10min，上清液倒入另一离心管，再加20mL?MCI－Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩涡半分钟，手摇5min。
C.7.1.4以4500r/min的速度离心5min，上清液倒入另一离心管，再加10mL?MCI－Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩涡半分钟，手摇5min。
C.7.1.5以4500r/min的速度离心5min,混合全部上清液（共50mL)，以4500r/min的速度离心10min。
C.7.1.6用MCI－Vaine-Na2EDTA液湿润抽滤瓶、布氏漏斗及滤纸，用较小真空（水泵）过滤上清液，2×2ml?MCI－Vaine-Na2EDTA液洗抽滤瓶并过滤。
C.7.1.7C18微柱先依次用20mL甲醇，20mL水冲洗，之后将过滤的液体倒入50mL注射器中，用2×2ml?MCI－Vaine-Va2EDTA液洗抽滤瓶并放入注射器中。
C.7.1.8C18微柱，使TCS药物吸附在C18微柱上。
C.7.1.9用20mL?水冲洗抽滤瓶倒入注射器中，并过滤，水洗C18微柱。
C.7.1.10用水冲洗完全后，顶空5min。
C.7.1.11用6.0mL?0.01mol/L草酸甲醇液把TCS药物从C18微柱中洗脱于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。
C.7.1.12上述液用滤膜过滤后，供高效液相色谱仪进行检测。
C.7.2测定条件
C.7.2.1色谱柱：C18柱。
C.7.2.2流动相：甲醇－乙腈－0.01mol/L草酸（1.5+1.5+2.5)。
C.7.2.3流速：1.5mL/min。
C.7.2.4检测波长：350nm。
C.7.2.5进样量：10μL。
C.7.3样品测定
分析样品按上述仪器作条件供高效液相色谱仪分析。
C.7.4计算
用色谱数据处理机或按式（C.1)计算试样中土霉素残留量：
W＝H·CS／HS·C………………………………（C.1)
式中：
W－试样中土霉素残留量，单位为微克每克（μg/g)；
H－试样液中土霉素的峰高，单位为毫米（mm)；
Hs－标准工作液中土霉素的峰高，单位为毫米（mm)；
CS-标准工作液中土霉素的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；
C－最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升（g/mL)。
注：计算结果需扣除空白值。
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