随着酶制剂在养殖业中应用日益增多，产品质量也参差不齐，市场上时有低劣酶制剂出现，而酶制剂酶活的测定比较繁琐，有关酶活的定义、测定方法、测定条件尚不统一，给广大用户在选购和使用时造成很多不便，难免上当受骗造成不必要的经济损失。本文就蛋白酶(中性蛋白酶和酸性蛋白酶)和淀粉酶活力简便、快速测定方法简介如下:
                  
     1  蛋白酶活力的测定
                  
     1.1 原理                  
                      
    采用福林-酚试剂法。福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)，由于蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)，可使蛋白质及其水解产物呈上述反应。因此可利用此原理测定蛋白酶活力。通常以酪蛋白为底物，在一定pH值和温度条件下，同酶液反应，经一段时间后终止酶促反应，经离心或过滤除去酪蛋白筹沉淀物后取上清液，用Na2CO3碱化，再加入福林-酚试剂显色，蓝色的深浅与滤液中生成产物酪氨酸量成正比;酪氨酸含量用分光光度计在660nm波长处测定，从而计算出蛋白酶的活力。
                  
    1.2  试剂
                  
     1.2.l 福林-酚试剂 
     向2000mL的磨口回流瓶中加入100g钨酸钠(Na2WO4·2H2O)、25g钼酸钠及700mL的去离子水，再加入50mL85%的磷酸及浓盐酸l00mL，充分混合后，接上回流冷凝管，以文火回流10h，结束后再加入150g的硫酸锂(LiSO4)、50mL去离子水及数滴溴水，再继续沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后滤液呈黄绿色(如仍呈绿色，需再重复滴加溴水的步骤)，加去离子水定容至1000mL乱，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中，贮于冰箱中可长期保存备用。此溶液使用时可按1:3比例用去离子水稀释。
                  
     1.2.2  0.4mol/L三氯乙酸(TCA)溶液 精确称取TCA65.4g，加去离子水定容至1000mL。
                  
    1.2.3  0.4mo1/L碳酸钠溶液  精确称取无水碳酸钠42.4g，加去离于水溶解后，定容至1000mL。
                  
    1.2.4  pH值3～6醋酸缓冲液
     精确取NaAc·3H2O16g与268mL浓度为6mol/L醋酸溶液混合，用去离子水稀释定容至1000mL。
     1.2.5  2%酪蛋白底物缓冲液
                  
     1.2.5.1  测试酸性蛋白酶缓冲液
      精确称取酪蛋白20g，加入0.1mol/L氢氧化钠20mL(用去离子水配制)，在水浴中加热溶解，然后用pH值3.6醋酸缓冲液定容至1000mL。当日配用或置于冰箱中保存。
                  
     1.2.5.2  测试中性蛋白酶缓冲液 精确称取酪蛋白20g，置于1000mL三角瓶中,加入0.2mol/L
    Na2HPO4溶液(去离子水配制)610mL，在沸水浴中搅拌使其溶解，冷却后过滤，加入0.2mol/L
   Na2HPO4溶液(去离子水配制)390mL，用去离子水定容至1000mL，即成pH7.0、2%酪蛋白溶液。当天配用或置于冰箱中保存。
                  
    1.2.6 100μg/mL酪氨酸溶液
    精确称取100mg酪氨酸，逐步加入0.lmol/L盐酸溶解后，用去离于水定容至100mL放入冰箱中保存，临用时用去离子水稀释10倍。
                  
    1.3  操作步骤
                  
     1.3.1  酪氨酸标准曲线的绘制
    取18支试管分成6组(每组3支，平行样)，编号，按表1分别加入标准酪氨酸、去离子水、0.4mol/L的碳酸钠和福林-酚试剂，混匀后，放入40℃水浴保温20min，然后在721型分光光度计上进行比色创定(波长66Onm)，以浓度为Oμg/mL酪氨酸反位液做空白对照。
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    1.3.2  样品酶活的测定
     精确称取酶粉5g，充分碾细,加去离子水100mL，在40℃水浴中搅拌30min，充分溶出酶蛋白，然后过滤，留滤液待测。取4支试管编号(1号为空白对照)，分别加入酶液1mL,1号管立即加入0.4mol/L
     TCA溶液2mL，使酶失活，另3支样品加入lmL pH
      7.0、浓度为2%酪蛋白底物缓冲液(如测酸性蛋白酶活力加pH3.6、2%酪蛋白底物缓冲液)，迅速混匀，并立即放入40℃恒温水浴准确计时，保温1Omin后，立即加入0.4mol/LTCA溶液2mL，终止反应，同时向1号空白管中加入1mL2%酪蛋白底物缓冲液，摇匀，继续置于水浴中保温2Omin，取出离心或过滤除去剩余酪蛋白及酶蛋白沉淀物，然后取各试管滤液1mL，分别移入另4支试管中，再加入0.4mol/L碳酸钠溶液5nL和己稀释的福林-酚试剂1mL，摇匀，保温显色20min后，进行比色测定(波长66Onm)。对照标准曲线，计算酪氨酸含量。
                  
     管号        标准酪氨酸   去离子水 Na2CO3 福林一酚试剂        酪氨酸含量
                           (100μg/mL)(mL)        (mL)        (0.4mol/L)(mL)     
                    (mL)        (μg/mL)
                   1        0              1.0        5        1        0
                   2        0.2              0.8        5        1        20
                   3        0.4              0.6        5        1        40
                   4        0.6              0.4        5        1        60
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