三聚氰胺(2,4,6-triamino-s-triazine,melamine)是一种化工原料,其与食品、饲料行业的联系源自2007年美国发生的“宠物毒粮”事件。由于目前国际上通用的测定饲料和食品中粗蛋白质含量的方法是“凯氏定氮法”,即以饲料和食品中含氮量乘以6.25得出粗蛋白质含量,而三聚氰胺(含氮量66%)加入后,可提高含氮量,因此,有不法分子便利用三聚氰胺这一特点,在饲料或食品中加入三聚氰胺以造成蛋白质含量高的假象。美国食品药品监督管理局(U.S. Food and Drug Administration,FDA)关于三聚氰胺添加到饲料中产生副作用的报道认为,三聚氰胺在猫和狗体内产生的肾毒性导致了肾结石以至于最后的肾衰竭。前人的研究也发现,三聚氰胺对动物的毒性主要表现为肾毒性。Xie 等在大鼠上的研究发现,饲料中添加1000毫克/千克三聚氰胺处理的大鼠的肾出现水肿,肾重量也比对照组有所提高。组织病理学检查发现该组大鼠的肾脏远端小管出现大量的管状扩张和少量的出血,肾间质有炎症发生,晶体主要沉积在肾乳头的集合管中。在家禽上的研究发现,随着三聚氰胺剂量的升高,肾损伤的发生率上升,且肾脏的损害程度与三聚氰胺剂量的增加有关。肾脏是三聚氰胺残留和造成危害的主要靶器官,且肾脏在生猪屠宰检疫中有着非常重要的诊断意义。但三聚氰胺对育肥猪肾脏结构与功能是否有不利的影响仍有待研究。因此,本研究针对人为在饲粮中添加三聚氰胺的情况,开展三聚氰胺对育肥猪肾脏结构与功能的影响,以及三聚氰胺在育肥猪肾脏中残留情况的研究,探索三聚氰胺是否能残留在育肥猪肾脏组织中,及其对育肥猪健康的影响,为禁止三聚氰胺在饲料中的违规添加提供数据支撑。
1 材料与方法
1.1 试验材料
三聚氰胺:纯度≥98.5%,购自成都市科龙化工试剂厂;三聚氰胺标准品(纯度≥99%,美国Sigma-Aldrich公司);[15N3]-三聚氰胺(纯度≥98%,美国CIL公司);乙腈、甲醇(色谱纯,美国Fisher 公司);正己烷、甲酸(分析纯,成都市科龙化工试剂厂);超纯水。
Agilent 1200高效液相色谱仪,配备G1322A脱气机、G1311A四元泵、G1316B柱温室、G1329A自动进校器以及20微升定量环(Wilmington,DE,USA);API 2000液相色谱/质谱联用仪,配备电喷雾离子源(ESI)(AB Sciex Instruments,USA) 。
1.2 试验动物与饲粮
选择初始体重为60千克左右的健康杜洛克×长白×大白生长育肥猪进行试验。采用玉米-豆粕型基础饲粮(粉料),参照NRC(1998)50~100千克生长育肥猪营养需要量配制。在基础饲粮中分别添加0、500和1000毫克/千克的三聚氰胺。基础饲粮组成及营养水平见表1。
表1 基础饲粮组成及营养水平(干物质基础) %
项目
含量
营养水平2
含量
玉米
76.78
消化能DE/(兆焦尔/千克)
14.10
豆粕
20.00
粗蛋白质
14.79
大豆油
1.00
钙
0.50
食盐
0.25
有效磷
0.20
胆碱
0.10
赖氨酸
0.82
磷酸氢钙
0.35
含硫氨基酸
0.51
石粉
0.89
苏氨酸
0.50
预混料1
0.53
色氨酸
0.17
赖氨酸
0.10
三聚氰胺/(毫克/千克)
0.21
合计
100.00
注:
1:预混料可为每千克饲粮提供:Fe 60毫克,Cu 6毫克,Zn 60毫克,Mn 4毫克,Se 0.3毫克,I 0.3毫克,VA 12000IU,VD3 3000IU,VE 7.5IU,核黄素 4.8毫克,吡哆醇 1.8毫克,D-泛酸 0.75毫克,VB12 0.03毫克,叶酸 0.15毫克,抗氧化剂BHT 0.15毫克。
2:营养成分含量均为计算值,三聚氰胺含量为实测值。