高效液相色谱法测定预混剂中维生素D3方法

  维生素D在动物骨骼组织矿化代谢过程中起着十分重要的作用,它不仅促进钙与磷在肠道的吸收,而且也作用于骨骼组织,促进钙磷最终形成骨质的基本结构,当维生素D缺乏时会导致动物患佝偻病和软骨病等。饲料预混剂中通常加入适量维生素D等作为营养强化剂,其含量的多少直接影响着预混剂的质量。近年来随着高效液相色谱技术的快速发展,已被广泛应用于食品及饲料成分分析领域。对于高效液相色谱分析预混剂中的维生素D,国家尚未定出标准,笔者就测定过程中的提取(皂化)探索了方法的准确度,就精密度做了重现性研究,建立了一种快速准确的测定方法。

1 仪器、试剂及色谱条件

  主要仪器:高效液相色谱仪M209(日本沃特斯公司产品),主要部件有M490紫外检测器、M740数据处理机、U6K自动进样器、M5102台;美国产Foxy-200HPLC制备仪。
  主要试剂:
VD3(德国Merck公司产品),其余试剂均为国产(分析纯)
  色谱条件:
C185 μm3.9 mm×300 mm
  流动相:甲醇∶异丙醇∶
1 mol/L醋酸盐缓冲液=50455(甲醇为紫外光谱纯,水为二次蒸馏水)
  紫外检测波长λ
=254 nmAufs=0.04
  流速:
1 mL/min

2 标准品及标准色谱图

  将德国Merck产品VD3配成15 %的甲醇溶液,用Foxy-200HPLC制备仪制备,馏分置五氧化二磷干燥器中减压干燥至恒重备用,用反相色谱法测定纯品含量为99.9999 %(归一法)。准确称取VD3 5 mg,用50 mL(以流动相作溶剂)溶剂溶于100 mL容量瓶中并定容,稀释至每毫升含VD3 5 μg作为标准储备液,用此标准储备液进样20 μL,得一标准色谱图,保留时间为8.095 min

3 线性范围

  用上述流动相作为溶剂,稀释标准储备液使每毫升含VD3 3.02.52.01.00.5 μg,分别进样20 μL,以浓度为横坐标,以峰面积积分值为纵坐标,得出不经过原点的回归方程:
  y=4.24×106C+0.0629×106, r=1
  
VD30.53.0μg浓度范围内线性关系良好。

4 回收率试验

  准确称取某饲料公司供作预混剂基料的玉米芯粉0.5 g5份,分别加入制备后得到的VD3纯品3 mg,强力搅拌均匀,按样品提取方法提取,用异丙醇稀释提取物至每毫升含2.5 μg左右,用0.45 μm膜过滤后进样20 μLM740数据处理机用二点外标法给出数据,根据提取稀释倍数计算出含量,回收率为98.3 %,见表1

1 VD3回收率试验数据   n=5

加入量(mg/dg) 测出量(mg/dg)

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