elisa法测定盐酸克伦特罗

    克伦特罗是β一肾上腺素激动剂(简称β一兴奋剂)的一种,从化学性质上看是苯乙醇胺的衍生物,其分子结构与肾上腺髓质等处分泌的肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺等儿茶酚胺类相似。在生理上,它们能抑制糖原合成酸并激活磷酸化酶,从而加速糖原分解,提高血糖和糖代谢率;通过作用于脂肪组织,可提高激素敏感脂酶活性,加速脂肪分解,提高血液中游离脂肪酸浓度,促进其在肌肉组织中的氧化分解;增加心率、心血输出量、心缩压,提高骨骼肌、冠状动脉和肝脏等局部血流量。在动物营养上,利用它具有促进畜禽脂肪分解、增加肌肉生长作用,作为营养重分配剂应用于饲料生产中。入食用了饲喂克伦特罗这种添加剂的动物所生产的畜产品后,由于畜产品中残留的克伦特罗会引起中毒,通常会出现肌肉震颤、必悸、精神紧张、头疼、肌肉疼痛、晕眩、反胃、呕吐、发烧、发抖等症状。因此,世界许多国家禁止在饲料中使用克伦特罗来增加动物的瘦肉率。我国政府已明文规定在畜牧生产中严禁使用克伦特罗等β一兴奋剂。

    目前,测定饲料中的克伦特罗的方法有高效液相色谱一质谱联用法( HPLC-MS)、气相色谱一质谱联用法(GC-MS)、高效波相色谱法(HPLC)和酶联免疫吸附法(ELISA)等,通常以前两种作为确认方法,后两种作为筛选方法。农业部2001年颁布的强制性行业标准一饲料中盐酸克伦特罗测定(NY-438)包括GC-MS和HPLC两种方法,前者为仲裁方法。而在生产实际中ELISA法应用比较普遍。

    ELISA法原理是利用免疫学抗原抗体特异性结合和酶的高效催化作用,通过化学方法将植物辣根过氧化物酶(HRP)与克伦特罗(CL)结合,形成酶偶联克伦特罗。将固相载体上已包被的抗体(羊抗兔lgG抗体)与特异性的抗克伦特罗抗体结合,然后加入待测克伦特罗和酶偶联克伦特罗,它们竞争性与克伦特罗抗体结合,洗涤后加底物,根据有色物的变化计量待测克伦特罗量。若待测克伦特罗多,则被结合的酶偶联克伦特罗少,有色物量就少。用目测法或比色法测定样品中的克伦特罗含量,比色的最佳波长为450nm,参比波长应大于600nm 。

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