我国南方地区高温高湿的地理环境极易引起配合饲料的霉变，在饲料中添加防霉剂是目前饲料防霉的常用措施。目前常用的饲料防霉剂多为化学合成的药物（如有机酸及酯类剂），其刺激性大，腐蚀性强，气味不良，且残留问题不易解决。当前，国内外都在开发天然饲料防霉剂，以望解决化学防霉剂的不足。以中草药为基础制备饲料防霉剂，不仅能达到良好的防霉效果，而且中草药多有清热解毒、促进免疫与生长及营养丰富的特点，在我国资源又很丰富，因而用于饲料防霉大有前途。为此，我们对几种中草药的抗霉菌活性及防霉效果作了较为系统的研究。
1 实验材料与器材
1.1 实验材料
1.1.1 饲料基料
蛋鸭全价颗粒饲料，其营养成分为：水分14.8％，粗蛋白17.6％，粗脂肪3.61％，总能量17.0MJ／kg。
1.1.2 供试霉菌
从我国南方地区霉变饲料及谷物中分离得到黄曲霉、白曲霉、寄生曲霉、黑曲霉、杂色曲霉、圆弧曲霉、桔青霉、皱褶青霉、产黄青霉、产紫青霉等９种霉菌作为供试菌种。
1.1.3 培养基
察氏培养基，液体察氏培养基，霉菌孢子悬浮液（按GB13092-91 附录Ａ制作，含菌数为10-6CFU/ml）。
1.1.4 中草药
上槿皮、白鲜皮、黄柏、射干、马兜铃、苦参、松叶、黄芩等８种中药分别用４５％乙醇回流提取，浓缩后成中草药浸膏。
1.2 实验器材
恒温恒湿培养箱，全自动高压灭菌锅，无菌操作台。
２ 实验方法
2.1 抗霉菌活性试验
2.1.1 杯碟法
将８种中草药浸膏用４５％乙醇溶液配制成每毫升含25ｍｇ生药的中药液备用。每种供试菌取10个培养皿，趋热倒入察氏固体培养基，冷却后倒入霉菌孢子悬浮液，制成上层含霉菌的琼脂平板。在平板中间轻轻垂直放置-0.8cm×1.0cm的不锈钢牛津杯，其中８杯分别倒入上述中药液，一杯倒入４５％乙醇溶液作空白，最后一杯倒入１％的山梨酸钾溶液作阳性对照。将平板置于２８℃培养箱中培养２～３ｄ，测量透明抑菌圈的直径。
2.1.2 二倍稀释法
先将中药浸膏用４５％乙醇溶液配成每毫升含100ｍｇ生药的中药液（并调ｐＨ值为5.5～6.0），再按倍比稀释法依次将药液稀释成100～0.781ｍｇ／ｍｌ的稀释液。取组织培养板（４０孔），每孔加入190μl相应浓度的中药稀释液及10μｌ霉菌孢子悬浮液，并作药液及察氏液体培养基对照。培养板置于２８℃下培养，连续观察２周，无菌生长的那一孔中药液的浓度即为最低抑菌浓度（MIC）。
2.2 中草药用于颗粒饲料防霉效果评价
取正常水分的颗粒饲料，按相应的MIC值分别均匀添加中草药浸膏，然后置于我国南方自然环境下储放，定期检测霉菌数（按GB13092-91进行）。实验终了测定各样品的黄曲霉毒素B1的含量（GB8381-87）。
３ 结果与讨论
3.1.1 表１说明土槿皮等８种中草药对我国南方地区饲料中常见的１０种霉菌的抑制圈的大小。很明显，土槿皮、黄芩、苦参的抗菌活性最强，与常用的化学防霉剂山梨酸钾相当；白鲜皮、射干、黄柏仅次之，抑菌圈直径均在13ｍｍ以上，属强活性范畴；接下来的是马兜铃，其抑菌活性中等，抑菌圈直径均在10ｍｍ以上；松叶的抑菌活性最弱。
表1 8种中草药对饲料霉菌的抑菌圈
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菌种 |
抑菌圈直径（mm） | ||||||||
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土槿皮 |
白鲜皮 |
黄柏 |
射干 |
马兜铃 |
苦参 |
松叶 |
黄芩 |
山梨酸钾 | |
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黄曲霉 |
28 |
17 |
20 |
14 |
10 |
24 |
6 |
20 |
25 |
|
白曲霉 |
24 |
19 |
14 |
14 |
10 |
25 |
6 |
2 |
25 |
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寄生曲霉 |
23 |
14 |
14 |
18 |
10 |
25 |
6 |
20 |
25 |
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黑曲霉 |
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