B.1 适用范围
本方法用于测定鸡和猪的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中金霉素的残留量。
B.2 原理
组织中金霉素经MCI－Vaine-Na2EDTA缓冲液（PH4.0）提取，过滤后，通过C18微柱水洗，用草酸甲醇将药物洗脱，洗脱液用高效液相色谱仪进行测定。
B.3 可靠的检测限
本方法在肌肉、肝脏、脂肪和肾脏组织中的检测限为0.05μg/g。
B.4 仪器
B.4.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器。
B.4.2 匀浆机。
B.4.3 离心机。
B.4.4 旋涡混合器。
B.4.5 自动电位滴定计。
B.4.6 磁力加热搅拌器。
B.4.7 C18微柱。
B.4.8 布氏漏斗。
B.4.9 球形漏斗。
B.4.10 滤膜：0.45μm。
B.4.11 抽滤瓶。
B.5 药品和试剂
B.5.1 盐酸金霉素标准品：纯度≥84％。
B.5.2 乙腈：色谱纯。
B.5.3 甲醇：分析纯。
B.5.4 乙酸铵：分析纯。
B.5.5 柠檬酸：分析纯。
B.5.6 依地酸二钠：分析纯。
B.5.7 磷酸氢二钠：分析纯。
B.5.8 草酸：分析纯。
B.5.9 三氟乙酸：分析纯。
B.5.10 N，N－二甲基甲酰胺：分析纯。
B.5.11 草酸铵：分析纯。
B.5.12 磷酸氢二铵：分析纯。
B.6 溶液
B.6.1 金霉素标准液：准确称取适量盐酸金霉素，用甲醇溶解，使成浓度为100μg/mL的标准储备液，置冰箱保存。临用前，取此储备液，用甲醇依次衡释成浓度为5.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.1、0.05μg/mL的标准工作液。
B.6.2 MCI－Vaine缓冲液：准确称取Na2HPO428.41g，用水溶解，定容于1000mL容量瓶中，简称溶液A。准确称取柠檬酸21.00g，用水溶解，定容于1000mL容量瓶中，简称溶称液B。取625mL溶液A和1000mL溶解B混匀，调节pH至4.0±0.05。
B.6.3 MCI－Vaine-Na2EDTA液：准确称取Na2EDTA60.49g溶解于1625mL的MCI－Vaine液中，使成0.01mol/L Na2EDTA的MCI－Vaine液。
B.6.4 0.01mol/L草酸甲醇溶液：准确称取草酸1.26g,用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。
B.6.5 0.01mol/L草酸溶液：准确称取草酸1.26g，用水溶解并定容于1000mL容量瓶中。
B.7 分析
B.7.1 提取和纯化
B.7.1.1 称取5.00g组织匀浆放入50mL聚丙烯离心管中，添加TCS药物，使成相应的浓度。
B.7.1.2 加入20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液，盖上帽，漩涡半分钟，手摇5min。
B.7.1.3 4500r/min的速度离心10min，上清液倒入另一离心管，再加入20mL MCI－Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩涡分半分钟，手摇5min。
B.7.1.4 4500r/min的速度离心5min，上清液倒入上个试管中，再加入10mL
MCI-Vaine-Na2EDTA 液于沉淀中，漩涡半分钟，手摇5min。
B.7.1.5 4500r/min 的速度离心5min，混合全部上清液（共50mL），4500r/min的速度离心10min。
B.7.1.6 用MCI－Vaine-Na2EDTA液湿润抽滤瓶、布氏漏斗及滤纸，用较小真空（水泵）过滤上清液，2×2mL MCI－Vaine-Na2EDTA液洗抽滤瓶在放入注射器中。
B.7.1.7 C18微柱先依次用20mL甲醇，20mL水冲洗，之后将过滤的液体倒入50mL注射器中，用2×2mL MCI－Vaine-Na2EDTA 液洗抽滤瓶并放入注射器中。
B.7.1.8 过C18微柱，使TCS药物吸附在C18微柱上。
B.7.1.9 用20mL 水冲洗抽滤瓶倒入注射器中，并过滤，水洗C18微柱。
B.7.1.10 用水冲洗完全后，顶空5min。
B.7.1.11 用6.0mL 0.01mol/L草酸甲醇液把TCS药物从C18微柱中洗脱于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。
B.7.1.12 上述液用滤膜过滤后，上高效液相色谱仪进行检测。
B.7.2 测定条件
B.7.2.1 色谱柱：C18柱。
B.7.2.2 流动相：甲醇－乙腈－0.01mol/L草酸（1.5+1.5+2.0,pH=2.0)。
B.7.2.3 流速：1.5mL/min。
B.7.2.4 检测波长：350nm.
B.7.2.5 进样量：10μL。
B.7.3 样品测定
分析样品按上述仪器操作条件供高效液相色谱仪分析。
B.7.4 计算
用色谱数据处理机或按式（B.1）计算试样中金霉素残留量：
W＝H·CS／HS·C………………………………（B.1)
式中：
W－试样中金霉素残留量，单位为微克每克（μg/g)；
H－试样液中金霉素的峰高，单位为毫米（mm)；
Hs－标准工作液中金霉素的峰高，单位为毫米（mm)；
CS-标准工作液中金霉素的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；
C-最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升（g/mL)。
注：计算结果需扣除空白值。
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